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solarbio核酸服務

更新時間:2012-05-24  |  點擊率:3439

  核酸服務

 

一、核酸的提取與純化

1、RNA的提取

 

新鮮組織提取效果佳,其次為液氮和-70℃及組織RNA保存液中保存的樣本,不推薦 使用-20℃及以下溫度下保存的樣本。

 

細菌用量:1-2ml ,需要新鮮培養(公司可代為培養,另行收費)。

植物用量:500mg ,需要新鮮植物葉片。

細胞用量: 10 5 -10 6 ,需要新鮮培養(公司可代為培養,另行收費)。

組織用量: 500mg ,需要新鮮標本或凍存在液氮罐中的標本。

血液用量: 5ml ,需要新鮮標本或凍存在液氮罐中的標本。

2、Genomic DNA的提取

 

新鮮組織提取效果佳,其次為液氮和-70℃保存的樣本,-20℃不宜長期保存樣本,否則提取的DNA長度較短。

 

細菌用量: 10ml收集液,需要新鮮或 -20 ℃保存標本。

植物用量:葉片100mg,需要新鮮或 -20 ℃保存標本。

細胞用量: 10 5 -10 6,需要新鮮或 -20 ℃保存標本。

組織用量: 25mg ,需要新鮮或 -20 ℃保存標本。

血液用量: 5ml ,需要新鮮標本或凍存在液氮罐中的標本。

酵母用量:10 5 -10 6 或10ml液體培養物,需要新鮮或 -20 ℃保存標本。

3、質粒 DNA 的小量 / 中量 / 大量提取

 

高拷貝質粒: 10ml 菌液, 25-50 μ g

低拷貝質粒: 20ml 菌液, 15-30 μ g

高拷貝質粒: 100-200ml 菌液, 500-1000 μ g

低拷貝質粒: 100-200ml 菌液, 500-800 μ g

10ml 菌液, 25-50 μ g

 

二、PCR及RT-PCR

1、PCR擴增條件的優化

客戶提供模板(可代提取)和引物(可代合成)

2、常規PCR實驗

 

客戶提供模板(可代提取)和引物(可代合成)

客戶提供模板(可代提取)和引物(可代合成)

客戶提供模板(可代提取)和引物(可代合成)

3、引物的設計與合成

 

采用兩套以上的軟件設計,保證引物的可靠性。請用戶提供相應

的模板序列,通過 傳送。

OPC ,PAGE,HPLC純化

4、RNA 的反轉錄及 PCR 擴增

 

由用戶提供新鮮制備的模板(可代提取)

由用戶提供引物(可代合成)

三、熒光定量PCR
 

 

服務項目:

常規定性分析:

通過終點法分析樣本中把序列的陰性/陽性,在終點讀板鑒定的同時對擴增過程進行全程跟蹤,可及時發現樣本污

染、假陽性、“弱陽性”等情況,是目前病原體檢測等臨床應用的佳選擇。同時也是科學研究領域的重要應用技術。

相對定量:

通過對不同樣本靶基因的表達或含量進行檢測,可以判斷不同樣本間靶基因表達的相對高低,是對不同樣本相

同靶基因表達情況的“比較”。

定量:

合成一個和某靶基因具有相同序列的片段(或構建載體)作為標準品,通過測量OD值便可以計算出標準品的摩

爾濃度,不同濃度的標準品在相同體系(即相同擴增效率)下對應的ct值具有高度的*性和良好的重復性,可以

作為該基因的“標尺”。通過對未知樣本中該靶基因ct值的檢測,便可由“標尺”測算出未知樣本中靶基因的摩爾

濃度。達到定量的目的。

HRM分析:

高分辨率溶解曲線是一種檢測基因突變、進行基因分型和SNP檢測的新工具,可以迅速的檢測出不同樣本中單

個堿基的差異。HRM 檢測技術操作簡便,速度快,高通量,靈敏性好,特異性高,同時對試劑、儀器、軟件及經驗

技術也提出了較高的要求。

檢測方法:

Sybr Green I 染料法:成本較低,并且可以通過溶解曲線發現非特異性擴增。

taqman 探針法:比染料法具有更高的特異性,但成本也相對較高。

其他:除以上兩種常用方法,我公司ROCHE 480 II還可以滿足Molecular beacon、LUX等其他多種方法的檢測。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 




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